Thane Krios (Тейн Криос) — Вид: Дрелл (Drell). Пол: Мужской. Класс: Ассасин (разновидность Штурмовика). Искуссный убийца, очень религиозный. Grunt (Грюнт) — Вид: Кроган. Пол: Мужской. Класс: Солдат. Искусственно выращенный «идеальный» кроган, пытающийся найти свое место в мире.
Subject Zero (Подопытная Ноль) — Вид: Человек. Пол: Женский. Класс: Адепт. Бежавшая заключенная из космический тюрьмы строгого режима. Так же известна как Jack (Джек).
Mordin Solus (Мордин) — Вид: Саларианец. Пол: Мужской. Класс: ученый (разновидность Инженера). Бывший боец подразделения саларианского спецназа Special Task Group. Принимал участие в разработке новой модификации генофага кроганов.
Tali’Zorah vas Normandy (Тали’Зора вас Нормандия) — Вид: Кварианка. Пол: Женский. Класс: Инженер. Была одним из компаньонов Шепарда в первой части игры.
Samara (Самара) — Вид: Азари. Пол: Женский. Класс: Блюститель/Юстицар (Justicar) (разновидность Адепта) — так называют азари посвятивших себя поддержанию справедливости любыми средствами, вплоть до убийства виновного. Происхождение: планета Тессия (Thessia)
Morinth (Моринт) — Вид: Азари. Пол: Женский. Класс: Ардат-Якши (Ardat-Yakshi) (разновидность Адепта). Дочь Самары, страдающая генетическим дефектом, вызывающим психопатию и смерть половых партнеров из-за неправильного ментального слияния. Можно взять в команду вместо Самары (зависит от принятых решений).
Miranda Lowson (Миранда Лоусон) — Вид: Человек. Пол: Женский. Класс: Офицер Цербера (разновидность Стража). Агент Цербера в команде Шепарда. Имеет генетические изменения (если более точно, то создана искусственно из генов ее отца и генов от других доноров, как идеальный человек). Лично знакома с Призраком (Illusive Man).
Jacob Taylor (Джейкоб Тэйлор) — Вид: Человек. Пол: Мужской. Класс: Оперативник Цербера (разновидность Штурмовика). Бывший солдат Альянса. Работал под началом Миранды Лоусон. Протагонист игры Mass Effect: Galaxy вышедшей на iPhone/iPod touch в 2009 году.
Legion (Легион) — Вид: Гет. Пол: Андроид. Класс: Инженер (возможно, Разведчик). «Истинный» гет, носящий кусок брони Шепарда, был показан в самом первом тизере к игре, а также в ролике «Enemies of Mass Effect 2». Гет, посланный найти Шепарда. Причина неизвестна. Рассказывает о существовании «истинных» гетов и «еретиков» (врагов из первой части)
Garrus Vakarian (Гаррус Вакариан) — Вид: Турианец. Пол: Мужской. Класс: Турианский агент (разновидность Разведчика). Знакомый игрокам по первой части игры, бывший сотрудник СБ Цитадели